Microbiological profile of raw refrigerated and processed bovine milk at dairy industries from Vale do Taquari, Rio Grande do Sul, Brazil

Milk is an essential food, widely consumed by the population. Brazil is one of the world's largest producers of milk. Milk quality is influenced by several factors in all its stages of production. The aim of this study was to determine the microbiological profile of refrigerated and processed raw bovine milk from industries in Vale do Taquari, state of Rio Grande do Sul, Brazil, using metagenomic analysis. A total of six samples were collected, one of refrigerated raw milk from the tanker truck, one of pasteurized milk and one of milk sterilized by the ultra-high temperature (UHT) process, in each of the industries. The identification of the milk microbiota was performed by sequencing the 16S rRNA gene. The results show that refrigerated raw milk has a greater number of microorganisms, followed by pasteurized milk and sterilized milk, successively. Processed milk showed the presence of beneficial microorganisms such as Streptococcus thermophilus and Streptococcus macedonicus. Nevertheless, even UHT milk showed the presence of microorganisms considered harmful, such as the Bacillus cereus group, Aeromonas dhakensis, Enterobacter bacterium and Acinetobacter haemolyticus. Metagenomics is a valuable tool for the thorough evaluation of the milk microbiota in order to implement the processing stages in industries.

Genomic characterization, antimicrobial resistance profiles, enterotoxin, and biofilm production of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from clinical and animal products origins in Eastern Turkey / Caracterização genômica perfis de resistência antimicrobiana, produção de enterotoxinas e biofilme Staphylococcus aureus resistente à meticilina isolado de origem clínica e de produtos de origem animal no leste da Turquia

Staphylococcus aureus is an opportunistic and ubiquitous pathogen found in the skin, nares, and mucosal membranes of mammals. Increasing resistance to antimicrobials including methicillin has become an important public concern. One hundred and eight (108) S. aureus strains isolated from a total of 572 clinical and animal products samples, were investigated for their biofilm capability, methicillin resistance, enterotoxin genes, and genetic diversity. Although only one strain isolated from raw retail was found as a strong biofilm producer, the percentage of antimicrobial resistance pattern was relatively higher. 17.59% of S. aureus strains tested in this study were resistant to cefoxitin and identified as methicillin-resistant S. aureus (MRSA) isolates. mecA and mecC harboring S. aureus strains were detected at a rate of 2.79% and 0.93%, respectively. In addition, staphylococcal enterotoxin genes including Sea, Seb, Sec, and Sed genes were found to be 18.5%, 32.4%, 6.5% and 3.7%, respectively. The phylogenetic relationship among the isolates showed relationship between joint calf and cow milk isolates. Multi locus sequence typing (MLST) revealed three different sequence types (STs) including ST84, ST829, and ST6238. These findings highlight the development and spread of MRSA strains with zoonotic potential in animals and the food chain throughout the world.

Staphylococcus aureus é um patógeno dúctil e ubíquo encontrado na pele, narinas e membranas mucosas de mamíferos. O aumento da resistência aos antimicrobianos, incluindo a meticilina, tornou-se uma importante preocupação pública. Cento e oito (108) cepas de S. aureus isoladas de um total de 572 amostras clínicas e de produtos animais foram investigadas por sua capacidade de biofilme, resistência à meticilina, genes de enterotoxinas e diversidade genética. Embora apenas uma cepa isolada do cru tenha sido encontrada como forte produtora de biofilme, a porcentagem do padrão de resistência antimicrobiana foi relativamente maior. Parte das cepas (17,59%) de S. aureus testadas neste estudo eram resistentes à cefoxitina e identificadas como isolados de MRSA. mecA e mecC abrigando cepas de S. aureus foram detectados a uma taxa de 2,79% e 0,93%, respectivamente. Além disso, verificou-se que os genes da enterotoxina estafilocócica, incluindo os genes Sea, Seb, Sec e Sed, eram 18,5%, 32,4%, 6,5% e 3,7%, respectivamente. A relação filogenética entre os isolados mostrou relação entre os isolados de bezerro e leite de vaca. A tipagem de sequência multiloco (MLST) revelou três tipos de sequência diferentes (STs), incluindo ST84, ST829 e ST6238. Essas descobertas destacam o desenvolvimento e a disseminação de cepas de MRSA com potencial zoonótico em animais e na cadeia alimentar em todo o mundo.

Species identification and antimicrobial susceptibility profile of bacteria associated with cow mastitis in southern Brazil / Identificação de espécies e perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos de bactérias associadas à mastite bovina no sul do Brasil

Bovine mastitis is the most common disease in dairy cattle and responsible for economic losses in the milk industry. The present study aimed to identify the main species and to evaluate the antimicrobial susceptibility of bacterial isolates from cow herds with mastitis in dairy farms from southern Brazil. A total of 107 milk samples were collected from different cow herds in one important dairy producing region in southern Brazil, including farms located in ten cities from the Northeast region in the Rio Grande do Sul state. Bacterial strains were isolated and submitted to presumptive identification by classical bacteriological methods. Bacterial species were also identified by MALDI-TOF MS and antimicrobial susceptibility testing was performed with 12 antimicrobials commonly used in dairy farms. Fifty-one bacterial strains were isolated and the presumptive identification demonstrated the occurrence of Staphylococcus spp. (82.3%), Bacillus spp. (3.9%), Klebsiella spp. (3.9%), Streptococcus spp. (3.9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) and Serratia sp. (2%). Forty-one isolates were successfully identified in the MALDI-TOF analysis, including 35 isolates from eleven different bacterial species. Importantly, there were eight different Staphylococcus species, with a high frequency of Staphylococcus chromogenes (48.6%) and Staphylococcus aureus (20%). Overall, bacterial isolates demonstrated resistance to penicillin (46.3%), tetracycline (39%), amoxicillin (36.6%), ampicillin (34.1%) and sulfamethoxazole/trimethoprim (31.7%). Enrofloxacin was the unique antimicrobial that all isolates were susceptible. In addition, there were six multidrug resistant isolates (five S. chromogenes and one S. aureus). This study highlights that bacterial pathogens with resistance to several antimicrobials were identified in cows from dairy farms in a very important milk producing region located in southern Brazil. Microbial identification of the bovine mastitis pathogens and determination of the antimicrobial profile is necessary for the rational use of the medicines.(AU)

A mastite bovina é a doença mais comum em gado leiteiro e responsável por perdas econômicas na indústria de laticínios. O presente estudo teve como objetivo identificar as principais espécies e avaliar a suscetibilidade antimicrobiana de isolados bacterianos de rebanhos bovinos com mastite em fazendas leiteiras no sul do Brasil. Um total de 107 amostras de leite foram coletadas em diferentes rebanhos bovinos em uma importante região produtora de leite do sul do Brasil, incluindo fazendas localizadas em 10 cidades da região Nordeste do estado do Rio Grande do Sul. As cepas bacterianas foram isoladas e submetidas à identificação presuntiva por métodos bacteriológicos clássicos. A identificação bacteriana foi confirmada por MALDI-TOF MS e o teste de sensibilidade antimicrobiana foi realizado com antimicrobianos comumente usados em fazendas leiteiras. Cinquenta e uma cepas bacterianas foram isoladas e a identificação presuntiva demonstrou a ocorrência de Staphylococcus spp. (82,3%), Bacillus spp. (3,9%), Klebsiella spp. (3,9%), Streptococcus spp. (3,9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) e Serratia sp. (2%). Os 41 isolados foram identificados com sucesso na análise MALDI-TOF, incluindo 35 isolados de onze espécies bacterianas diferentes. É importante ressaltar que houve a ocorrência de oito espécies diferentes de Staphylococcus, com alta frequência de Staphylococcus chromogenes (48,6%) e Staphylococcus aureus (20%). No geral, os isolados bacterianos tiveram alta resistência à penicilina (46,3%), tetraciclina (39%), amoxicilina (36,6%), ampicilina (34,1%) e sulfametoxazol/trimetoprima (31,7%). A enrofloxacina foi o único antimicrobiano que todos os isolados foram suscetíveis. Além disso, havia seis isolados multirresistentes (cinco S. chromogenes e um S. aureus). Este estudo destaca que os patógenos bacterianos com resistência aos antimicrobianos estão presentes em fazendas leiteiras de subsistência em uma importante região produtora no sul do Brasil. É necessário o monitoramento constante dos patógenos da mastite bovina e a determinação de seu perfil antimicrobiano para o uso racional dos medicamentos.(AU)

Species identification and antimicrobial susceptibility profile of bacteria associated with cow mastitis in southern Brazil / Identificação de espécies e perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos de bactérias associadas à mastite bovina no sul do Brasil

Bovine mastitis is the most common disease in dairy cattle and responsible for economic losses in the milk industry. The present study aimed to identify the main species and to evaluate the antimicrobial susceptibility of bacterial isolates from cow herds with mastitis in dairy farms from southern Brazil. A total of 107 milk samples were collected from different cow herds in one important dairy producing region in southern Brazil, including farms located in ten cities from the Northeast region in the Rio Grande do Sul state. Bacterial strains were isolated and submitted to presumptive identification by classical bacteriological methods. Bacterial species were also identified by MALDI-TOF MS and antimicrobial susceptibility testing was performed with 12 antimicrobials commonly used in dairy farms. Fifty-one bacterial strains were isolated and the presumptive identification demonstrated the occurrence of Staphylococcus spp. (82.3%), Bacillus spp. (3.9%), Klebsiella spp. (3.9%), Streptococcus spp. (3.9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) and Serratia sp. (2%). Forty-one isolates were successfully identified in the MALDI-TOF analysis, including 35 isolates from eleven different bacterial species. Importantly, there were eight different Staphylococcus species, with a high frequency of Staphylococcus chromogenes (48.6%) and Staphylococcus aureus (20%). Overall, bacterial isolates demonstrated resistance to penicillin (46.3%), tetracycline (39%), amoxicillin (36.6%), ampicillin (34.1%) and sulfamethoxazole/trimethoprim (31.7%). Enrofloxacin was the unique antimicrobial that all isolates were susceptible. In addition, there were six multidrug resistant isolates (five S. chromogenes and one S. aureus). This study highlights that bacterial pathogens with resistance to several antimicrobials were identified in cows from dairy farms in a very important milk producing region located in southern Brazil. Microbial identification of the bovine mastitis pathogens and determination of the antimicrobial profile is necessary for the rational use of the medicines.

A mastite bovina é a doença mais comum em gado leiteiro e responsável por perdas econômicas na indústria de laticínios. O presente estudo teve como objetivo identificar as principais espécies e avaliar a suscetibilidade antimicrobiana de isolados bacterianos de rebanhos bovinos com mastite em fazendas leiteiras no sul do Brasil. Um total de 107 amostras de leite foram coletadas em diferentes rebanhos bovinos em uma importante região produtora de leite do sul do Brasil, incluindo fazendas localizadas em 10 cidades da região Nordeste do estado do Rio Grande do Sul. As cepas bacterianas foram isoladas e submetidas à identificação presuntiva por métodos bacteriológicos clássicos. A identificação bacteriana foi confirmada por MALDI-TOF MS e o teste de sensibilidade antimicrobiana foi realizado com antimicrobianos comumente usados em fazendas leiteiras. Cinquenta e uma cepas bacterianas foram isoladas e a identificação presuntiva demonstrou a ocorrência de Staphylococcus spp. (82,3%), Bacillus spp. (3,9%), Klebsiella spp. (3,9%), Streptococcus spp. (3,9%), Corynebacterium sp. (2%), Enterococcus sp. (2%) e Serratia sp. (2%). Os 41 isolados foram identificados com sucesso na análise MALDI-TOF, incluindo 35 isolados de onze espécies bacterianas diferentes. É importante ressaltar que houve a ocorrência de oito espécies diferentes de Staphylococcus, com alta frequência de Staphylococcus chromogenes (48,6%) e Staphylococcus aureus (20%). No geral, os isolados bacterianos tiveram alta resistência à penicilina (46,3%), tetraciclina (39%), amoxicilina (36,6%), ampicilina (34,1%) e sulfametoxazol/trimetoprima (31,7%). A enrofloxacina foi o único antimicrobiano que todos os isolados foram suscetíveis. Além disso, havia seis isolados multirresistentes (cinco S. chromogenes e um S. aureus). Este estudo destaca que os patógenos bacterianos com resistência aos antimicrobianos estão presentes em fazendas leiteiras de subsistência em uma importante região produtora no sul do Brasil. É necessário o monitoramento constante dos patógenos da mastite bovina e a determinação de seu perfil antimicrobiano para o uso racional dos medicamentos.

Dairy goat production in the semi-arid region: productive and reproductive analysis, and the influence of the adoption of hygienic practices on milk quality / Produção de cabras leiteiras no semiárido: análise produtiva e reprodutiva, bem como influência da adoção de práticas higiênicas na qualidade do leite

The aim of this study was to evaluate the productive and reproductive performance of dairy goat genotypes, as well as the influence of hygienic practices by farmers on the quality of goat milk. Productive and reproductive data of 81 Anglo Nubian and Alpine crossbred goats, as well as data on total milk production of goats over 100 days of lactation and partial production up to 56 days of lactation. Also, in natura milk samples from 160 properties in the region were evaluated. At the time of collection, a questionnaire was applied to diagnose goat milk production systems. Data from productive and reproductive performance were evaluated by Tukey test and descriptive analysis using the SPSS program. The herd presented a variation of the total milk production in lactation (TMP) from 267.40kg to 468.55kg, with lactation length ranging from 157 to 247 days, and average daily production between 1.43 and 1.89kg/day. Fertility rates were satisfactory, with the lowest rate being 76% and the highest 92%, with an average of 85.24% considering the six seasons of birth. The means of the gestation periods varied between 144 and 152 days. Regarding the sanitary characterization, 73% of farmers performed a cleaning of the room before and after milking. However, 94.8% of farmers did not eliminate the first jets of milk and only 29.2% used the screened mug test to identify clinical mastitis. Only 41% of farmers performed pre and post-dipping and 30.2% applied the iodine solution. Only 8.3% of farmers used disposable paper towels. However, 92% of producers still used fabric towel. It was also observed that 99% of the properties stored milk in buckets or cans without refrigeration. In the microbiological analysis, a small amount of milk samples (5.6%) was contaminated with Staphylococcus aureus, however the total coliform count was high. Regarding the somatic cell count, it was found that 86% of the properties presented values above one million cells per mL of sample. The study demonstrated the prevalence of several factors that contribute to the vulnerability of milk contamination in various stages of production such as milking and processing. Thus, the guidance and awareness of those responsible is extremely important to improve goat milk quality in the semi-arid region of Paraíba.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar o desempenho produtivo e reprodutivo de genótipos caprinos leiteiros, assim como a influência da adoção das práticas higiênicas pelos produtores sobre a qualidade do leite caprino. A primeira parte da pesquisa foi realizada na Estação Experimental Pendência-PB. Foram analisados dados produtivos e reprodutivos de 81 cabras Anglo-Nubiana e alpinas mestiças, bem como dados de produção total de leite das cabras acima de 100 dias de lactação e produção parcial até 56 dias de lactação. Também foram avaliadas amostras de leite in natura de 160 propriedades da região. No momento da coleta, foi aplicado um questionário de diagnóstico dos sistemas de produção de leite caprino. Os dados de desempenho produtivo e reprodutivo foram avaliados pelo teste de Tukey e pela análise descritiva utilizando o programa SPSS. O rebanho apresentou uma variação da produção de leite total na lactação desde 267,40kg a 468,55kg, com durações de lactação variando de 157 e 247 dias, e produção média diária entre 1,43 e 1,89kg/dia. As taxas de fertilidade foram satisfatórias, sendo a menor taxa de 76% e a maior de 92%, com uma média de 85,24% considerando as seis estações de parição. As médias dos períodos de gestação variaram entre 144 e 152 dias. Quanto à caracterização da sanidade, 73% dos produtores realizam limpeza da sala antes e após a ordenha. No entanto, 94,8% dos produtores não eliminam os primeiros jatos de leite e somente 29,2% utilizam o teste da caneca telada para identificação de mastite clínica. Apenas 41% dos produtores realizam pré-dipping e pós-dipping e 30,2% aplicam a solução de iodo. Somente 8,3% dos produtores usam toalhas descartáveis e 92% ainda utilizam toalha de tecido. Observou-se, ainda, que 99% das propriedades armazenam o leite ordenhado em baldes ou latões, sem refrigeração. Pequenas quantidades de amostras (5,6%) estavam contaminadas por Staphylococcus aureus, porém a contagem de coliformes totais teve valor elevado. Em relação à contagem de células somáticas, verificou-se que 86% das propriedades apresentaram CCS acima de um milhão de células por mL, devendo-se ajustar corretamente os manejos alimentar, produtivo e reprodutivo. As épocas de parição, lactação e o genótipo influenciaram de forma direta os índices produtivos e reprodutivos dos animais. Obsevou-se a prevalência de vários fatores que contribuem para a vulnerabilidade de contaminação do leite em diversas etapas de produção, tais como ordenha e processamento. Portanto, a orientação adequada e a conscientização dos responsáveis são de extrema importância para melhorar a qualidade do leite de cabra na região semiárida da Paraíba.(AU)

Standardization of a rapid quadruplex PCR method for the simultaneous detection of bovine, buffalo, Salmonella spp, and Listeria monocytogenes DNA in milk / [Padronização de um método rápido de PCR quadriplex para a detecção simultânea de DNA de bovino, bubalino, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em leite]

The objective of the present study was to Standardize a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for the authentication of bovine and buffalo milk, and to detect the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. For this, the target DNA was extracted, mixed, and subjected to a PCR assay. Milk samples were defrauded and experimentally contaminated with microorganisms to assess the detection of target DNA at different times of cultivation, bacterial titers, and concentration of genetic material. In addition, the protocol was tested with DNA extracted directly from food, without a pre-enrichment step. The proposed quadruplex PCR showed good accuracy in identifying target DNA sequences. It was possible to simultaneously identify all DNA sequences at the time of inoculation (0h), when the samples were contaminated with 2 CFU/250mL and with 6h of culture when the initial inoculum was 1 CFU/250mL. It was also possible to directly detect DNA sequences from the food when it was inoculated with 3 CFU/mL bacteria. Thus, the proposed methodology showed satisfactory performance, optimization of the analysis time, and a potential for the detection of microorganisms at low titers, which can be used for the detection of fraud and contamination.

O objetivo do presente estudo foi padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a autenticação de leite bovino e bubalino e a detecção da presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Para isso, o DNA-alvo foi extraído, misturado e submetido ao ensaio de PCR. Amostras de leite foram fraudadas e contaminadas experimentalmente com os micro-organismos, para se avaliar a detecção do DNA-alvo em diferentes tempos de cultivo, os títulos bacterianos e a concentração de material genético. Além disso, o protocolo foi testado com DNA extraído diretamente do alimento, sem a etapa de pré-enriquecimento. A PCR quadriplex proposta mostrou boa precisão na identificação de sequências de DNA-alvo. Foi possível identificar simultaneamente todas as sequências de DNA no momento da inoculação (0h), quando as amostras estavam contaminadas com 2 UFC/250mL, e com seis horas de cultura, quando o inóculo inicial foi de 1 UFC/250mL. Também foi possível detectar diretamente as sequências de DNA do alimento quando este foi inoculado com 3 UFC/mL de bactérias. Dessa forma, a metodologia proposta apresentou desempenho satisfatório, otimização do tempo de análise e potencial para detecção de micro-organismos em baixos títulos, podendo ser utilizada para detecção de fraude e contaminação.

Composition and microbiological quality of refrigerated raw milk in two seasons of the year in Santa Helena, Western Paraná / Composição e qualidade microbiológica do leite cru refrigerado em duas estações do ano em Santa Helena, oeste do Paraná / Composición y calidad microbiológica de la leche cruda refrigerada en dos estaciones del año en Santa Helena, oeste de Paraná

This study aimed at quantifying the occurrence of proteolytic psychotropic microorganisms and total coliforms in refrigerated raw milk, in addition to assessing the quality through its physical-chemical composition. The samples were collected in 10 dairy farms in the municipality of Santa Helena ­ Western Paraná. Two collections were made, one during the spring and the other during the summer. Samples of refrigerated raw milk were carried out directly from the cooling tank, aseptically, packed in sterile bottles and transported under isothermal conditions (± 4 ºC) to the laboratory where the physical-chemical composition and microbial populations were determined. The levels of fat had great amplitude between the seasons, being higher in the summer, while there was no variation for the contents of protein, lactose, minerals, and non-fat solids. The total coliform count did not differ between seasons. The values obtained for proteolytic psychotropic counts were higher in the summer. A significant positive correlation was found between the total coliform counts, the proteolytic psychotropic counts (r=0.73), the levels of protein (r=0.45), non-fat solids (r=0.45), and minerals (r=0.46). Also, the proteolytic psychotropic counts showed a positive correlation with the cryoscopic index. The milk components met the requirements of NI76. The quality of refrigerated raw milk in the municipality of Santa Helena, Western Paraná was not satisfactory for total coliforms, due to its high incidence, indicating the need for good practices in milking management. Proteolytic psychotropic bacteria presented low proliferation, thus not affecting milk quality.(AU)

O presente estudo teve como objetivo quantificar a ocorrência de microrganismos psicrotróficos proteolíticos e de coliformes totais em leite cru refrigerado além de avaliar a qualidade por meio da sua composição físico-química. As amostras foram coletadas em 10 propriedades leiteiras no município de Santa Helena ­ Oeste do Paraná. Foram realizadas duas coletas, uma durante a primavera e outra no verão. As amostragens do leite cru refrigerado foram realizadas diretamente no tanque de resfriamento, de forma asséptica, acondicionado em frascos esterilizados e transportado sob condições isotérmicas (± 4ºC) ao laboratório onde foram determinadas a composição físico-química e as populações microbianas. Os teores de gordura tiveram grande amplitude entre as estações do ano, sendo superior no verão, enquanto que não houve variação para os teores de proteína, lactose, minerais e sólidos desengordurados. A contagem de coliformes totais não diferiu entre as estações. Os valores obtidos para contagens de psicrotróficos proteolíticos foram superiores no verão. Foi constatada correlação significativa positiva entre as contagens de coliformes totais com as contagens de psicrotróficos proteolíticos (r=0,73) e os teores de proteína (r=0,45), sólidos desengordurados (r=0,45) e minerais (r=0,46). Além disto, as contagens de psicrotróficos proteolíticos apresentaram correlação positiva com o índice crioscópico. Os componentes do leite atenderam as exigências da IN76. A qualidade do leite cru refrigerado no município de Santa Helena, Oeste do Paraná não foi satisfatória em relação aos coliformes totais, devido sua alta incidência, indicando a necessidade de boas práticas no manejo de ordenha. As bactérias psicrotróficas proteolíticas tiveram baixa proliferação, não afetando a qualidade do leite.(AU)

El presente estudio tuvo como objetivo cuantificar la ocurrencia de microorganismos psicrotróficos proteolíticos y de coliformes totales en leche cruda refrigerada, además de evaluar la calidad a través de su composición fisicoquímica. Las muestras fueron recolectadas en 10 granjas lecheras del municipio de Santa Helena ­ Oeste de Paraná. Se realizaron dos colecciones, una en primavera y otra en verano. Las muestras de leche cruda enfriada se realizaron directamente en el tanque de enfriamiento, de forma aséptica, se empacaron en botellas estériles y se transportaron en condiciones isotérmicas (± 4ºC) al laboratorio donde se determinó la composición fisicoquímica y las poblaciones microbianas. Los niveles de grasa tuvieron gran amplitud entre las estaciones, siendo más altos en verano, mientras que no hubo variación para los contenidos de proteínas, lactosa, minerales y sólidos desgrasados. El recuento total de coliformes no difirió entre temporadas. Los valores obtenidos para los recuentos de psicotrópicos proteolíticos fueron mayores en verano. Se encontró una correlación positiva significativa entre los recuentos de coliformes totales y los recuentos de psicrótroficos proteolíticos (r=0.73) y los niveles de proteínas (r=0.45), sólidos desgrasados (r=0.45) y minerales (r=0.46). Además, los recuentos de psicrótroficos proteolíticos mostraron una correlación positiva con el índice crioscópico. Los componentes de la leche cumplieron con los requisitos de IN76. La calidad de la leche cruda refrigerada en el municipio de Santa Helena, Oeste de Paraná no fue satisfactoria en relación a los coliformes totales, debido a su alta incidencia, lo que indica la necesidad de buenas prácticas en el manejo del ordeño. Las bacterias psicrotróficas proteolíticas tuvieron baja proliferación, no afectando la calidad de la leche.(AU)

Avaliação da contaminação por Staphylococcus aureus em queijo coalho artesanal elaborado com leite de cabra produzido no estado de Pernambuco / Evaluation of contamination by Staphylococcus aureus in artisanal curd cheese made from goat's milk produced in the state of Pernambuco

A fabricação de queijo coalho artesanal elaborado com leite de cabra é composta pelas etapas de obtenção do leite, refrigeração, manipulação e armazenamento, que aumentam o risco de contaminação do produto. Objetivou-se neste estudo avaliar o nível de contaminação por Staphylococcus aureus em amostras de queijo coalho artesanal produzido com leite de cabra cru no estado de Pernambuco, Brasil, bem como avaliar a concordância entre a técnica oficial da Instrução Normativa nº62/2003 (Mapa) e a técnica molecular (gene nuc) para identificar S. aureus no queijo. Houve crescimento de colônias típicas de Staphylococcus aureus em 100% das amostras, e a contagem variou de 7,0×103 a 8,6×106 UFC/g. Das 30 amostras analisadas, 18 (60,0%) apresentaram valores superiores ou iguais a 105UFC/g, e 21 (70,0%) estavam contaminadas por S. aureus. A concordância entre os métodos de diagnóstico de S. aureus em queijo coalho caprino foi moderada. O nível de contaminação dos queijos revela a necessidade de ações de melhoria das condições de elaboração do produto, a fim de garantir um produto seguro aos consumidores.(AU)

The manufacture of artisanal Coalho cheese made from goat's milk is composed of the steps of obtaining milk, refrigeration, handling and storage that increase the risk of product contamination. The objective of this study was to evaluate the level of contamination by Staphylococcus aureus in samples of artisanal Coalho cheese produced with raw goat's milk in the state of Pernambuco, Brazil. In addition to evaluating the agreement between the official technique of Normative Instruction nº62/2003 (MAPA) and the molecular technique (nuc gene) to identify S. aureus in cheese. There was growth of typical Staphylococcus aureus colonies in 100% of the samples and the count ranged from 7.0×103 to 8.6×106 CFU/g. Of the 30 analyzed samples, 18 (60.0%) presented values greater than or equal to 105CFU/g and 21 (70.0%) were contaminated by S. aureus. The agreement between the diagnostic methods of S. aureus in goat cheese was moderate. The level of contamination of cheeses reveals the need for actions to improve the preparation conditions of the product in order to guarantee a safe product to consumers.(AU)

Microbiological and molecular detection of Mycoplasma bovis in milk samples from bovine clinical mastitis / Detecção microbiológica e molecular de Mycoplasma bovis em amostras de leite oriundas de mastite clínica bovina

The genus Mycoplasma includes more than 200 bacterial species that cause disease in animals. It is responsible for causing mastitis in bovines and may be related to other manifestations, such as arthritis and pneumonia in calves and heifers. The present study aimed to detect Mycoplasma bovis isolated from milk samples of bovine clinical mastitis, and to compare the isolation rates in two culture media: Hayflick and SP4. An initial screening was performed in order to detect the presence of the class Mollicutes in 1166 milk samples from clinical mastitis by the conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. According to the 1166 milk samples evaluated, 8.6% (100/1166) were positive to class Mollicutes. Regarding molecular analyses, 1.1% (13/1166) of conventional PCR for positive M. bovis was obtained and 0.9% (11/1166) in real-time PCR. The results of the microbiological culture of the 100 samples previously screened demonstrated that 6% (6/100) of colony growth have been developed when using the Hayflick medium, and 11% (11/100) when using the SP4 medium (including the positive on Hayflick medium). Concerning the 11 isolates obtained in the microbiological culture, conventional PCR confirmed M. bovis in nine of them, and two cultures were negative. In the phylogenetic analysis of the isolates, all of them were grouped in M. bovis and M. agalactiae clusters. The results confirmed the importance of the presence of M. bovis in the etiology of bovine clinical mastitis and reinforced the need for further studies to elucidate other Mycoplasma species that may be involved in bovine clinical mastitis in Brazil.(AU)

O gênero Mycoplasma inclui mais de 200 espécies que causam doenças nos animais. É responsável por quadros de mastite em bovinos, podendo também estar relacionado à outras manifestações como artrite e pneumonia em bezerros e novilhas. O presente estudo objetivou a detecção de Mycoplasma bovis isolados a partir de amostras de leite de mastite clínica bovina, bem como, a comparação da taxa de isolamento em dois meios de cultura: Hayflick e SP4. Para efeito de triagem amostral, foram avaliadas quanto à presença da classe Mollicutes 1166 amostras de leite de casos de mastite clínica pela técnica de PCR convencional. Das 1166 amostras de leite avaliadas, 8,6% (100/1166) foram positivas à classe. Nas análises moleculares, obteve-se 1,1% (13/1166) de positividade para Mycoplasma bovis na PCR convencional e 0,9% (11/1166) na PCR em tempo real. Os resultados do cultivo microbiológico das 100 amostras triadas previamente demonstraram 6% (6/100) de crescimento de colônias ao se utilizar o meio Hayflick e 11% (11/100) ao se utilizar o meio SP4 (incluindo as positivas ao primeiro). A partir dos 11 isolados obtidos no cultivo microbiológico, a PCR convencional confirmou Mycoplasma bovis em nove deles, e dois foram negativos para o agente. Na análise filogenética dos isolados, todos agruparam no cluster Mycoplasma bovis e Mycoplasma agalactiae. Frente aos resultados, ressalta-se a importância da presença de Mycoplasma bovis na etiologia da mastite clínica bovina e reforça a necessidade de estudos mais aprofundados para a elucidação de outras espécies de micoplasmas que possam estar envolvidas na mastite bovina.(AU)

Characterization of the milk production chain and study of the dairy herd health in the city of Codó, Maranhão / Caracterização da cadeia produtiva do leite e estudo da sanidade do rebanho leiteiro no município de Codó, Maranhão

In order to characterize the milk production chain and study the dairy herd health in the city of Codó, state of Maranhão, Brazil, a checklist was applied and tests were carried out to detect clinical and subclinical mastitis using mastitis test strip cup and the California mastitis test (CMT), from June to August 2019, in 295 dairy cows from 20 farms. Water and milk samples were collected for microbiological analysis. It was observed that herdsmen do not have adequate knowledge about good agricultural practices. As for milking, only 60% are performed in corrals with coverage, and as for the floor, 60% are made of clay and 40% are made of concrete. In 35% of the properties, the water used in milking management comes from wells and the rest from dams. Pre and postdipping practices, CMT, mastitis strip cup test and the adoption of a mastitis control program are not carried out on any of the properties Two cows tested positive for subclinical mastitis and one cow tested positive for tuberculosis. In the microbiological analysis of the milk, a high count of total coliforms and thermotolerants was obtained, with values between 23 to > 1,100 MPN/mL and < 3.0 to > 1,100 MPN/mL, respectively. The presence of coagulase positive staphylococci was also observed in 25% of the samples. The water samples also showed high contamination by total coliforms between 4.1 to > 2.419.6 MPN/mL and 40% showed the presence of Escherichia coli. These results reflect the need for more investments in technical assistance and technical training for these producers.(AU)

Este estudo teve como objetivo caracterizar a cadeia produtiva do leite e estudar a sanidade do rebanho leiteiro do município de Codó, estado do Maranhão, Brasil, através da aplicação de um checklist e da realização de exames para detecção de mastite clínica e subclínica pelos métodos da caneca do fundo escuro e California mastitis test (CMT), no período de junho a agosto de 2019, em 295 vacas leiteiras procedentes de 20 propriedades. Coletaram-se amostras de leite e água da ordenha para análises microbiológicas. Observou-se que os ordenhadores não possuem conhecimento adequado sobre as boas práticas agropecuárias. Quanto à realização da ordenha, apenas 60% realizam-na em currais com cobertura; quanto ao piso, 60% são de terra batida e 40% de concreto. A água utilizada no manejo da ordenha é proveniente de poços em 35% das propriedades e as demais de açudes. As práticas de pré e pós-dipping e os testes CMT e caneca de fundo escuro e a adoção de programa de controle da mastite não são realizados em nenhuma das propriedades. Diagnosticaram-se duas vacas com mastite subclínica e uma com tuberculose e verificou-se elevada contaminação por coliformes totais e termotolerantes nas análises microbiológicas do leite, variando entre 23 NMP/mL a >1.100 NMP/mL e < 3.0 a > 1.100 NMP/mL, respectivamente, e presença de estafilococos coagulase positivos em 25% das amostras. As amostras de água também apresentaram elevada contaminação por coliformes totais entre 4,1 NMP/mL a > 2.419,6 NMP/mL e 40% apresentaram presença de Escherichia coli. Esses resultados refletem a necessidade de mais investimentos em assistência técnica e treinamento técnico para esses produtores.(AU)

Influence of time and storage temperature on raw milk deteriorating microbiota / Influência do tempo e temperatura de estocagem sobre a microbiota deteriorante do leite cru

The quality of raw milk depends on initial microbial contamination and conditions of storage until industry processing. Considering the influence of time and storage temperature on raw milk microbiota, the objective of this work was to quantify and monitor the multiplication of these groups under different conditions. For this purpose, 41 samples of raw milk were collected immediately after milking, stored in the following storage conditions: 25 °C/2 h; 35 °C/2 h; 7 °C/24 h; 7 °C/48 h and 7 °C/60 h and analyses of aerobic mesophilic, psychrotrophic and proteolytic psychrotrophic microorganisms. The milk samples analyzed in the study had an initial mean count of mesophilic aerobes of 5.38 Log CFU/mL at Time Zero. The milk stored at 25 °C/2 h and 35 °C/2 h kept the mesophilic aerobic counts within the limits established by the legislation (5.48 Log CFU/mL), with an increase in counts of psychrotrophic and proteolytic microorganisms. When stored at 7 °C/24 h and 7 °C/48 h, the count of mesophiles exceeded the established parameters. A significant increase in the count of proteolytic psychrotrophs and psychrotrophs was also observed during storage at 7 °C from 24 h. The results of this study indicate that the temperature of 7 °C is not suitable for the milk conservation, since it was not able to control the microbial multiplication. Thus, the results contribute to the change in milk storage temperature proposed by the new Brazilian legislation.(AU)

A qualidade do leite cru depende da contaminação microbiana inicial e das condições de armazenamento até o processamento na indústria. Considerando a influência do tempo e da temperatura de armazenamento na microbiota do leite cru, o objetivo deste trabalho foi quantificar e monitorar a multiplicação desses grupos de microrganismos sob diferentes condições. Para tanto, foram coletadas 41 amostras de leite cru imediatamente após a ordenha, armazenadas nas seguintes condições de armazenamento: 25 °C/2 h; 35 °C/2 h; 7 °C/24 h; 7 °C/48 h e 7 °C/60 h para análise de microrganismos psicrotróficos, aeróbios mesófilos, psicrotróficos e proteolíticos. As amostras de leite analisadas no estudo apresentaram uma contagem média inicial de aeróbios mesófilos de 5.38 Log UFC/mL no Tempo Zero. O leite armazenado a 25 °C/2 h e 35 °C/2 h manteve as contagens aeróbias mesófilas dentro dos limites estabelecidos pela legislação (5,48 Log UFC/mL), com aumento nas contagens de microrganismos psicrotróficos e proteolíticos. Quando armazenado a 7 °C/24 h e 7 °C/48 h a contagem de mesófilos excedeu os parâmetros estabelecidos. Um aumento significativo na contagem de psicrotróficos e psicrotróficos proteolíticos também foi observado durante o armazenamento a 7 °C a partir das 24 h. Os resultados deste estudo indicam que a temperatura de 7 °C não é adequada para a conservação do leite, uma vez que não foi capaz de controlar a multiplicação microbiana. Assim, os resultados contribuem para a mudança na temperatura de armazenamento de leite proposta pela nova legislação brasileira.(AU)

Boas práticas agropecuárias na produção leiteira: diagnóstico e ajuste de não conformidades / Good agricultural practices for milk production: diagnosis and non-compliances adjustment

Objetivou-se com este estudo desenvolver e validar uma ferramenta semiológica para diagnóstico do nível de adoção e conformidade das boas práticas agropecuárias em fazendas de produção de leite, segundo requisitos preconizados pela Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) e pela International Dairy Federation (IDF). A ferramenta foi testada em 62 fazendas de produção de leite, em seis diferentes regiões do estado do Rio Grande do Sul, como parte das ações do Projeto Protambo - "Transferência de tecnologias para o desenvolvimento da atividade leiteira no RS com base nas boas práticas agropecuárias" - da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Embrapa, entre janeiro de 2014 e março de 2017. A validação da ferramenta não apontou divergências estatisticamente significativas entre avaliadores, satisfazendo o parâmetro de exatidão para métodos de medições exigidos pela ISO/IEC 17025. Foi evidenciado um espaço de variação que mostrou desenvolvimento de métrica, em que se obteve consistência (coerência) de medição. O teste t-Student aproximado para a comparação de médias de não conformidades nas BPA mostrou melhora significativa no grupo tratamento (diagnóstico seguido de plano de ajuste) quando comparado ao controle (diagnóstico sem plano de ajuste subsequente). Essa nova abordagem semiológica contribui para a adoção das BPA em fazendas leiteiras, para a melhoria da qualidade do leite e da segurança na cadeia produtiva de lácteos.(AU)

This study reports the development and validation of a novel diagnostic tool, based on the FAO and IDF ¨Guide to Good Dairy Farming Practice¨. Sixty-two dairy farms over six different regions within the State of Rio Grande do Sul were selected, evaluated and ranked, from January 2014 to March 2017; as part of the PROTAMBO- Dairying Technology Transfer Project (EMBRAPA). Results indicated that the proposed diagnostic tool was significantly consistent among different field evaluators, meeting trueness validation parameter for ISO/IEC 17025 validation requirement. Binomial distribution of probabilities of positive changes showed significant kind of metric evolution for the treatment group when compared to the control, in addition to significant consistency. Approximated t-Student test for comparison of the means of GAP non-compliances demonstrated significant improvements for the treatment group relative to the control. This novel approach could assist in overcoming existing and emerging GAP challenges to maximize dairy quality.(AU)

Ocorrência de não conformidades físico-químicas e microbiológicas em leite e derivados no estado de Minas Gerais, no período de 2011 a 2015 / Occurrence of physico-chemical and microbiological nonconformities in milk and dairy products in the State of Minas Gerais, from 2011 to 2015

Milk and dairy products are potential sources for spoilage and pathogenic microorganisms, and although a huge amount of data is collected by the official inspection services, only a few reports are available to the public. This study aimed to evaluate the data for physicochemical and microbiological quality of pasteurized milk and dairy products, collected for inspection at industrial establishments registered at the Instituto Mineiro de Agropecuária (IMA), which is an official inspection service in Minas Gerasi State, Brazil. A total of 192 analyzes were done in 2011, 1008 in 2012, 1368 in 2013, 1271 in 2014, 1582 in 2015, adding up to 5421 samples analyzed by standard analytical techniques in official government laboratories. The statistical analysis was descriptive. A total of 2010 analytical results were nonconform to the legal requirements. Among the results, 78 (4.3%) samples of mozzarella cheese were positive for alkaline phosphatase, and freezing point results for pasteurized milk were outside the legal requirements in 86 (10%) samples. Staphylococcus coagulase positive was above limits in 80 (4.4%) samples of mozzarella cheese. These results indicate a risk to the consumer's health even in pasteurized products, and the need for effective enforcement of good manufacturing practices in the food industries.(AU)

Effect of fermented milk with kefir grains on the in vitro demineralization of bovine tooth enamel / Efecto de la leche fermentada con granos de kéfir sobre la desmineralización in vitro del esmalte dental bovino

The dental caries is a progressive destruction of the teeth tissue due to the disbalance in the normal molecule interactions between the enamel and the bio!lm, which alters the demineralization-remineralization process. Milk fermentation produces caseinphosphopeptides with proved remineralizing capacity of the enamel. The presence of these peptides in fermented milk with ke!r grains has been described. The purpose of this work was to evaluate in vitro the capacity of milk ke!r to prevent the demineralization of dental enamel. Bovine incisors (n=68, 17 per group) were treated for 72 h with different solutions: I: artificial saliva at pH 7.2 , II: demineralizing solution at pH 4.5, III: supernatant of kefir fermented milk at pH 4.5, IV: milk supernatant at pH 4.5. The effects of treatments were evaluated by the change in the weight of the specimens, calcium concentration in the solution and by scanning electron microscopy (SEM) of the enamel. Kefir milk supernatant prevented the demineralization process, that was evidenced by a change in weight and calcium concentration that were not different from group I, although the pH was 4.5. In contrast, group IV showed a decrease in weight and an increase in calcium concentration, compared with group I (one way ANOVA, p<0.05). Images of SEM agree with the values of weight and calcium concentration. These results indicate that kefir milk supernatant has a protective effect on enamel demineralization in vitro. (AU)

La caries dental es una patología debido a un desequilibrio en las interacciones moleculares normales entre el esmalte y la biopelícula, que altera el proceso de desmineralización remineralización. La fermentación de la leche produce fosfopéptidos de caseína con probada capacidad remineralizante del esmalte, y se ha descripto la presencia de estos péptidos en la leche fermentada con granos de kéfir. El propósito de este trabajo fue evaluar in vitro la capacidad del kéfir de leche para prevenir la desmineralización del esmalte dental. Sesenta y ocho incisivos bovinos (17 por grupo) fueron tratados durante 72 h con diferentes soluciones: I: saliva artificial, pH 7.2, II: solución desmineralizante, pH 4.5, III: sobrenadante de leche fermentada con kefir, pH 4.5, IV: sobrenadante de leche, pH 4.5. El proceso de desmineralización se evaluó mediante el cambio en el peso de las muestras, la concentración de calcio en la solución y microscopía electrónica de barrido (SEM) del esmalte. El sobrenadante de leche fermentada con kéfir impidió el proceso de desmineralización, que se evidenció por un cambio en el peso y la concentración de calcio que no discreparon del grupo I, a pesar de haber tenido un pH de 4.5. En contraste, el grupo IV mostró una disminución en el peso y un aumento en la concentración de calcio, en comparación con el grupo I (ANOVA a un criterio, p<0.05). Las imágenes SEM concuerdan con los cambios en el peso y la concentración de calcio en los grupos estudiados. Los datos obtenidos demuestran que el sobrenadante de la leche tratada con kéfir tiene un efecto protector sobre la desmineralización del esmalte in vitro, inducida por el pH ácido. (AU)

Frequency of Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPRs) in non-clinical Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium strains / Frequência das repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas (CRISPRs) em cepas não-clínicas de Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium

Abstract The fidelity of the genomes is defended by mechanism known as Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) systems. Three Type II CRISPR systems (CRISPR1- cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas) have been identified in enterococci isolates from clinical and environmental samples. The aim of this study was to observe the distribution of CRISPR1-cas, CRISPR2 and CRISPR3-cas in non-clinical strains of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium isolates from food and fecal samples, including wild marine animals. The presence of CRISPRs was evaluated by PCR in 120 enterococci strains, 67 E. faecalis and 53 E. faecium. It is the first report of the presence of the CRISPRs system in E. faecalis and E. faecium strains isolated from wild marine animal fecal samples. The results showed that in non-clinical strains, the CRISPRs were more frequently detected in E. faecalis than in E. faecium. And the frequencies of CRISPR1-cas and CRISPR2 were higher (60%) in E. faecalis strains isolated from animal feces, compared to food samples. Both strains showed low frequencies of CRISPR3-cas (8.95% and 1.88%). In conclusion, the differences in the habitats of enterococcal species may be related with the results observe in distribution of CRISPRs systems.

Resumo A fidelidade dos genomas ​​é defendida por mecanismos conhecidos como sistemas de repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas (CRISPRs). Três tipos de sistemas CRISPR II (CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas) têm sido identificados em cepas de enterococos isolados de amostras clínicas e ambientais. O objetivo deste estudo foi observar a distribuição dos CRISPR1-cas, CRISPR2 e CRISPR3-cas em cepas não-clínicas de Enterococcus faecalis e Enterococcus faecium isoladas de amostras alimentícias e fecais, incluindo animais marinhos selvagens. A presenca dos CRISPRs foi determinada por PCR em 120 cepas de enterococos, sendo 67 E. faecalis e 53 E. faecium. É o primeiro relato da presença do sistema CRISPRs nas estirpes E. faecalis e E. faecium isoladas de amostras fecais de animais marinhos selvagens. Os resultados mostraram que em cepas não-clínicas, os CRISPRs foram mais frequentemente detectados em E. faecalis do que em E. faecium. E as frequências de CRISPR1-cas e CRISPR2 foram maiores (60%) em cepas de E. faecalis isoladas de fezes de animais, quando comparadas à amostras de alimentos. Ambas as cepas apresentaram baixas freqüências de CRISPR3-cas (8,95% e 1,88%). Em conclusão, as diferenças nos habitats das espécies de enterococos podem estar relacionadas com os resultados observados na distribuição dos sistemas CRISPRs.

Bacterial identification, somatic cell count, antimicrobial profile and toxigenic Staphylococcus strains search from mastitic cow milk samples on small farms properties / Identificação bacteriana, contagem de células somáticas, perfil antimicrobiano e pesquisa de linhagens toxigênicas de Staphylococcus em amostras de leite bovino de pequenas propriedades rurais

Bovine mastitis has a negative impact on milk production and can pose risks to public health. The present study aimed to evaluate the quality of bovine milk from small farms in the Botucatu/SP region. Somatic cell counts (SCC), identification of pathogens involved in mastitis, and sensitivity antimicrobial profile of staphylococci isolated were performed. The presence of enterotoxin encoding genes in isolates of staphylococci obtained from milk was investigated. Milk samples from individual mammary quarters of cows were submitted to the California mastitis test (CMT) and SCC. Of the 239 dairy cows from 21 dairy herds evaluated (mean = 11.4 animals/property), two cows (0.8%) presented clinical mastitis and 86 (35.9%) subclinical mastitis. Bacterial culture was performed in 177 quarter milk samples. Staphylococci were identified in 55 (31.1%), corynebacteria in 45 (25.4%), streptococci in 25 (14.1%) and coliforms in four (2.3%) milk samples. Average SCC from culture-positive samples was 1598x103 cells/mL, in case of staphylococci was 1362x103 cells/ml, streptococci was 2857x103 cells/mL, corynebacteria was 976x103 cells/mL and in the cases of coliforms 1161x103 cells/mL were obtained. Staphylococci showed a high sensitivity (>95%) to cephalothin, cotrimoxazole, enrofloxacin, and gentamicin, with a 41.2% resistance to penicillin and 11.8% to oxacillin. Both coagulase positive (CPS) and negative staphylococci (CNS) carried genes encoding enterotoxins in 21.6% of the first group and 41.9% in the second. The sea gene was the most detected 45.8% (n=24) between them, followed by seb with 29.2% and sec with 25.0%. The sed gene was not identified. We highlight the potential risk to public health in the possibility of strains of Staphylococcus spp. enterotoxin-producing genes that can cause staphylococcal food poisoning.(AU)

A mastite bovina impacta negativamente a produção leiteira e pode acarretar riscos à saúde pública. O presente estudo teve como objetivo a avaliação da qualidade do leite bovino proveniente de pequenas propriedades na região de Botucatu/SP. Foi realizada a contagem de células somáticas (CCS), identificação dos patógenos envolvidos nas mastites, e realizado o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos dos estafilococos isolados. Pesquisou-se a presença de genes codificadores de enterotoxinas em isolados de estafilococos obtidos a partir do leite mastítico. Amostras de leite de quartos mamários individuais de vacas foram submetidas ao "California mastitis test" (CMT) e à CCS. Das 239 vacas em lactação provenientes de 21 rebanhos leiteiros avaliados (média = 11,4 animais/propriedade), dois (0,8%) animais apresentaram mastite clínica e, 86 (35,9%) mastite subclínica. 177 amostras de leite foram cultivadas em ágar sangue bovino 5% e ágar MacConckey e obteve-se 55 (31,1%) Staphylococcus spp., 25 (14,1%) Streptococcus spp., 45 (25,4%) Corynebacterium spp. e quatro (2,3%) coliformes. A média da CCS das amostras procedentes de todos os quartos mamários infectados avaliados foi de 1598x103 células/mL, enquanto que nos casos que foram isolados Staphylococcus spp. foi de 1362x103 células/mL, Streptococcus spp. 2857x103 células/mL, Corynebacterium spp. de 976x103 células/mL e nos casos de coliformes 1161x103 células/mL. Os estafilococos revelaram grande sensibilidade (>95%) à cefalotina, cotrimoxazol, enrofloxacina e gentamicina, com resistência de 41,2% à penicilina e 11,8% à oxacilina. Tanto estafilococos coagulase positivos (ECP) como negativos (ECN) revelaram genes codificadores de enterotoxinas em 21,6% do primeiro grupo e 41,9% no segundo. O gene sea foi o mais detectado 45,8% (n=24), seguido pelo seb com 29,2% e sec com 25,0%. O gene codificador da sed não foi identificado. Frente aos resultados, destaca-se o risco potencial à saúde pública pela possibilidade de veiculação de linhagens de Staphylococcus spp. carreadores de genes produtores de enterotoxinas, podendo ocasionar toxi-infecções alimentares.(AU)

Enterotoxin-encoding genes in Staphylococcus aureus from buffalo milk / Genes codificadores de enterotoxinas em Staphylococcus aureus no leite de búfalas

This paper investigated the occurrence of Staphylococcus aureus and the detection of enterotoxin-encoding genes of these strains in milk collected from 30 Murrah buffaloes used to produce dairy products in Brazil. A total of 68 strains of Staphylococcus aureus were found as identified by conventional laboratory tests, and thus screened for sea, seb, sec, sed, see, seg, seh and sei enterotoxin-encoding genes by polymerase chain reaction (PCR). Twelve strains containing enterotoxin-amplified genes were found, with higher expression for the sei and seh genes. These results can be attributed to animal health and inadequate cleaning of the equipment, indicating the need for better quality control in animal production and health lines. The results of this study with the presence of pathogens and their enterotoxigenic potential indicate a source of food poisoning, as well as being a pioneering study in the detection of new enterotoxins for buffalo milk.(AU)

Este estudo investigou a ocorrência de isolados de Staphylococcus aureus e a detecção de genes que codificam a enterotoxigenicidade dessas cepas em leite de búfala utilizado na produção de laticínios no Brasil. As amostras foram coletados em 30 búfalos da raça Murrah, identificado por testes laboratoriais convencionais, foram identificados um total de 68 cepas de S. aureus e rastreados para os genes que codificam a enterotoxina sea, seb, sec, sed, see, seg, seh and sei por reação em cadeia da polimerase (PCR). Doze cepas contendo genes da enterotoxina foram amplificadas, com maior expressão para os genes sei e seh. Esses resultados podem ser atribuídos à saúde animal e à higiene inadequada do equipamento, indicando a necessidade de melhor controle de qualidade nas linhas de produção e saúde animal. Os resultados desta pesquisa, com a presença de patógenos e seu potencial enterotoxigênico, indicam uma fonte de intoxicação alimentar, além de ser uma pesquisa pioneira na detecção de novas enterotoxinas para o leite de búfala.(AU)

Risk factors for high bulk milk somatic cell counts in dairy herds from Campos das Vertentes region, Minas Gerais State, Brazil: a case-control study / Fatores de risco para contagens elevadas de células somáticas no leite de tanque em rebanhos de bovinos da região de Campos das Vertentes, Minas Gerais, Brasil: um estudo de caso-controle

High bulk milk somatic cell counts (BMSCC) are indicative of failures related to the control of mastitis in the herd, which compromises the quality of the milk and generates great losses for the producers and for the industry. A case-control study was carried out in dairy herds in the Campos das Vertentes region, Minas Gerais State, Brazil, in order to contribute to the knowledge of the risk factors involved with elevated BMSCC. The study involved 46 dairy herds, of which 30 were considered cases (BMSCC ≥700,000 cells/mL of milk) and 16 control farms (BMSCC ≤200,000 cells/mL of milk). Sixteen qualitative variables and four quantitative variables were analyzed. The results showed that the risk factors for BMSCC ≥700,000 cells/mL were the presence of Staphylococcus aureus and Streptococcus agalactiae pathogens in bulk milk, non-use of pre and post-dipping, non-use of disposable paper towel for drying of mammary glands, non-monitoring of mastitis in the herd by means of California Mastitis Test (CMT) or individual somatic cell counts (SCC), non-implementation of the milking line and therapy of dry cows and failures in hygiene of teats and udders before milking. Moderate correlations were also observed between the elevation of BMSCC and counts of S. aureus and BMSCC and counts S. agalactiae in bulk milk, and a moderate correlation between S. aureus and S. agalactiae counts in bulk milk. Failures with regard to the maintenance and use of milking equipment, including manual pressure application in milking assemblies, unregulated milking vacuum pressure, and vacuum loss during milking, and maintenance failures of the milking machine and bulk milk tank were also pointed out as important risk factors of BMSCC elevation. The results of this study provided subsidies for the elaboration of more effective programs for mastitis control and improvement of raw milk quality, reducing the losses caused by the disease to producers and industry.(AU)

Altas contagens de células somáticas no leite do tanque (CCSt) são indicativas de falhas relacionadas com o controle da mastite no rebanho, o que compromete a qualidade do leite e gera grandes perdas para os produtores e para a indústria. Visando identificar os fatores de risco envolvidos com a CCSt elevada, foi realizado um estudo de caso-controle em rebanhos bovinos leiteiros da região de Campos das Vertentes, em Minas Gerais. O estudo envolveu 46 propriedades, das quais 30 foram consideradas casos (CCSt ≥700.000 cels/mL de leite) e 16 propriedades controles (CCSt ≤200.000 cels/mL de leite). Foram analisadas 16 variáveis qualitativas e quatro variáveis quantitativas. Os resultados demonstraram que os fatores de risco para valores de CCSt ≥700.000 cels/mL de leite foram a presença dos patógenos Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae, não utilização do pré e de pós-dipping, não utilização de papel toalha descartável para a secagem dos tetos, não monitoramento da mastite por meio do California Mastitis Test (CMT) ou CCS individual, não implementação da linha de ordenha e da terapia de vacas secas e falhas na higiene de tetos e de úbere antes da ordenha. Também se observaram correlações moderadas entre a CCSt e as contagens de S. aureus e entre CCSt e as contagens de S. agalactiae, e correlação moderada entre as contagens de S. aureus e de S. agalactiae no leite do tanque. Falhas com relação à manutenção e utilização dos equipamentos de ordenha, aplicação de pressão manual nos conjuntos da ordenha, pressão de vácuo da ordenha desregulada, perda de vácuo durante a ordenha e falhas de manutenção da ordenhadeira e do tanque de expansão foram também apontadas como fatores de risco para elevação da CCSt. Os resultados deste estudo possibilitaram identificar fatores de risco importantes para contagens elevadas de CCSt que poderão fornecer subsídios para a elaboração de programas de controle mais efetivos para a mastite e para a melhoria da qualidade do leite, mitigando o impacto que a doença causa para os produtores e para a indústria.(AU)

Effect of seasonal conditions and milk management practices on bulk milk quality in Minas Gerais State - Brazil / Efeito da sazonalidade e práticas de manejo na qualidade do leite de tanque no estado de Minas Gerais - Brasil

The influence of seasonality and the training and implementation of good dairy farming practices on raw milk production and quality was evaluated on dairy farms in Minas Gerais State, Brazil. The physico-chemical composition, somatic cell count (SCC) and total bacterial count (TBC) were determined in 3,096 milk samples collected from bulk tanks originated from 43 dairy farms over a three-year period and correlated with key climatic factors. The recommended milking management practices were applied through a training program and correlated with the seasonal data in three stages: I) prior to training (dry period); II) 48 days after the training (transition period); III) 96 days after the training (rainy period). In the first stage, a diagnosis of the situation was performed with raw milk samplings for laboratory analysis, and training for implementation of good milking practices. In stages II and II, the checklist and laboratory analysis were also performed. The rainfall and high temperatures were found to represent the main factors affecting the milk composition and production, and TBC. The composition and physical properties of raw milk, and the TBC and SCC parameters can be controlled or minimized by applying proper milking management practices and constant monitoring.(AU)

Avaliou-se a influência das condições climáticas em regiões tropicais, bem como do treinamento e da implementação de boas práticas de manejo na produção e qualidade do leite em distintos períodos em fazendas leiteiras no estado de Minas Gerais, Brasil. No presente estudo, as características físico-químicas do leite, a contagem bacteriana total (CBT) e a contagem de células somáticas (CCS) foram determinadas em 3.096 amostras de tanques de leite proveniente de 43 fazendas leiteiras, durante um período de três anos, e correlacionadas com os principais fatores climáticos (temperatura diária do ar mínima, média e máxima; pluviosidade e umidade relativa). Foram avaliados os resultados obtidos nas análises das amostras de leite cru coletadas no ano anterior (2009/2010) e também no posterior (2011/2012) àquele em que foi realizado o treinamento para implementação das boas práticas de manejo de ordenha (2010/2011), compreendendo três etapas: antes do treinamento (período seco - tempo 0, etapa I), 48 dias após o treinamento (período de transição - etapa II) e 96 dias após o treinamento (período chuvoso - etapa III). Na etapa I foi realizado um diagnóstico de situação com coleta de amostras para análises laboratoriais, aplicação da lista de verificação padronizada e treinamento para a implementação das boas práticas de manejo de ordenha; na etapa II foram realizadas novas análises laboratoriais e reaplicação da lista de verificação para avaliar a eficiência do treinamento; e na etapa III foi realizada a repetição da etapa II. Com base no histórico dos três anos, observou-se que condições climáticas de alta temperatura e pluviosidade representam importantes fatores que afetam a composição do leite e o volume produzido, assim como parâmetros higiênico-sanitários do leite. Ademais, as boas condições de manejo são ferramentas úteis, eficazes, práticas e essenciais para a maior produção de leite com qualidade, desde que constantemente monitoradas.(AU)

Composition of milk and mammary gland health in Criollo breed mares during lactation / Composição de leite e saúde de glândulas mamárias em éguas da raça Crioula durante lactação

The aim of this study was to evaluate the components of milk and mammary gland health of Criollo mares. A total of 12 mares coming from a farm in southern Brazil were used. Samples of milk were taken from each mare every two weeks up to 180 days of lactation. The characteristics analyzed were fat, protein, lactose, total solids, somatic cell count (SCC) and total bacterial count (TBC). In relation to the health of the udder and the milk of the mares, the SCC was 24.1 x 103cells / ml and TBC was 44 x 103CFU / ml, while the average of milk components was 0.57% fat, 1.95% protein, 6.71% lactose and 9.24% total solids. Stage of lactation and individual characteristics may influence the level of milk components. The low SCC and TBC found in the Criollo breed mares' milk ensure the quality of their milk compared to other species.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar os componentes do leite e a saúde das glândulas mamárias de éguas da raça Crioula. Foi utilizado um total de 12 éguas, localizadas em uma fazenda no sul do Brasil. Foram retiradas amostras de leite de cada égua quinzenalmente até 180 dias de lactação. As características analisadas foram gordura, proteína, lactose, sólidos totais, contagem de células somáticas (CCS) e contagem bacteriana total (CBT). Em relação à saúde do úbere e ao leite das éguas, a CCS foi 24,1 x 10 3 células/mL e a CBT foi 44 x 10 3 UFC/mL, enquanto a média dos componentes do leite foi 0,57% de gordura, 1,95% de proteína, 6,71% de lactose e 9,24% de sólidos totais. O estágio da lactação e as características individuais podem influenciar o nível de componentes do leite. As baixas taxas de CCS e CBT encontradas no leite de éguas da raça Crioula asseguram a qualidade desse leite comparado ao de outras espécies.(AU)